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即時聚合酶連鎖反應 （英語： Real-time polymerase chain reaction ）是一種在 DNA 擴增反應中，以螢光染劑偵測每次 聚合酶鏈鎖反應 （PCR）循環後產物總量的方法 [1] 。 此實驗法已被眾多科學家採用，因為其偵測範圍廣、靈敏度高、準確、專一及快速。 PCR的發展因為偵測感染病患的病毒（不過RNA病毒須先反轉錄成DNA才進行PCR）或細菌量、癌症監測、診斷個別基因差異的用藥反應等應用而大幅提高。 PCR的方法是基於偵測目標物在反應前及PCR後產物的量化關係，越早探測到指定螢光值表示目標基因組越多。 相對於終端PCR方式（end-point PCR，傳統的PCR配合 凝膠電泳 ，在反應後偵測），qPCR（定量即時聚合酶連鎖反應）有許多優點。
A real-time polymerase chain reaction (real-time PCR, or qPCR when used quantitatively) is a laboratory technique of molecular biology based on the polymerase chain reaction (PCR). It monitors the amplification of a targeted DNA molecule during the PCR (i.e., in real time), not at its end, as in conventional PCR.
Real-time PCR/qPCR assays have become the tool of choice for the rapid and sensitive determination and quantitation of nucleic acid in various biological samples, with diverse applications such as gene expression analysis, the detection of genetically modified organisms in food, and cancer phenotyping.
RT-qPCR的簡介. 以RNA為起始材料. 當起始材料為RNA時，可使用定量反轉錄PCR (RT-qPCR)進行分析。 在這種方法中，RNA首先透過反轉錄酶（reverse transcriptase）從total RNA或messenger RNA（mRNA）轉錄成互補DNA（cDNA）。 之後cDNA將作為qPCR反應的模板。 RT-qPCR可用於各式應用，包括基因表現分析、RNAi驗證、微陣列驗證、病原體檢測、基因檢測和疾病研究。 一步法（One-step） vs. 兩步法（Two-step）RT-qPCR. RT-qPCR可以一步法（one-step）或者兩步法（two-step）檢測進行分析（圖1，表1）。
2020年6月29日 · 由於 Real-Time PCR 能克服常規 PCR 的缺點，並且具有操作簡便，靈敏度高，重複性好等優點，因此發展非常迅速，從而熒光定量 PCR 獲得廣泛應用。 Real-Time PCR實驗原理. 實時 PCR 就是在 PCR 擴增過程中，熒光信號被收集，轉化為成為擴增和熔解曲線，以實現對 PCR 進程進行實時檢測。 具體數據就是基線，熒光閾值和 Ct 值。 Ct 值就是熒光值達到閾值時候的 PCR 循環次數。 Ct 值跟初始模板的量成反比。 第 3-15 個循環的熒光值就是基線（baseline），是由於測量的偶然誤差引起的。 閾值（threshold）一般是基線的標準偏差的 10 倍。 實驗設計.
當PCR開始運行即啟動初始變性步驟，將雙股模板DNA分離成單股，以便 引子 能結合於目標區域並開始延伸。 投入的DNA完全變性，有助於確保在第一個擴增循環週期內有效地對目標序列進行擴增。 此外，這個步驟的高溫環境，有助於讓可能存在於樣品的不耐熱蛋白酶或核酸酶喪失活性，而高溫對 熱穩定性DNA聚合酶 的影響最小。 當使用 熱啟動DNA聚合酶 時，此步驟也是為了該酶的激活，然而產品供應商可能會建議採取獨立的啟動步驟。 初始變性步驟通常會於94–98°C進行1–3分鐘。 此步驟的時間與溫度，可能因模板DNA的性質和緩衝液鹽濃度而有差異。 例如，根據DNA的複雜性和大小，哺乳動物的基因組DNA可能需要比質體和PCR產物更長的作用過程。
即時聚合酶鏈式反應 （英語： Real-time polymerase chain reaction ）是一種在 DNA 擴增反應中，以螢光染劑偵測每次 聚合酶鏈鎖反應 （PCR）循環後產物總量的方法 [1] 。 此實驗法已被眾多科學家採用，因為其偵測範圍廣、靈敏度高、準確、專一及快速。 PCR的發展因為偵測感染病患的病毒（不過RNA病毒須先反轉錄成DNA才進行PCR）或細菌量、癌症監測、診斷個別基因差異的用藥反應等應用而大幅提高。 PCR的方法是基於偵測目標物在反應前及PCR後產物的量化關係，越早探測到指定螢光值表示目標基因組越多。 相對於終端PCR方式（end-point PCR，傳統的PCR配合 凝膠電泳 ，在反應後偵測），qPCR（定量即時聚合酶鏈式反應）有許多優點。
